2022-10-20
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血清、血浆、细胞裂解液等生物标本处理


样本存放和稳定性:

 

样本在2-8度条件下,是可以储藏72h,在-20度或-80度是可以储藏半年以上。样本收集后,并非一次检测完,请按照一次用量分开包装冻存,防止反复冻融。

 

血清:将收集的康那动物血清分离管的全血标本在室温置放0.5-2小时或4度过夜,随后1000×g离心20min,取上清就可以,或将上清置于-20度或-80度存放,但应尽量避免反复冻融。

 

血浆:用EDTA或肝素做为抗凝剂采集标本,并把标本在采集后的30分钟内于2-8度1000×g离心15min,取上清就可以检测,或将上清置于-20度或-80度存放,但应尽量避免反复冻融。

 

组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)添加玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。以便进一步裂解组织细胞,能够对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10min,取上清就可以检测,或将上清置于-20度或-80度存放,但应尽量避免反复冻融。

 

细胞裂解液:吸弃培养液,用PBS(0.01M,pH7.4)将细胞洗一遍。用细胞刮刮下细胞(不能用胰酶和EDTA处理),添加2-5mLPBS(0.01M,pH7.4)。悬浮细胞可省略。收集细胞悬液,4度1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。加入适量的预冷PBS或非变性细胞裂解液(临用前添加蛋白酶抑制剂)重悬细胞,通常6孔板一个孔的细胞量需要150-250μLPBS重悬。将样品放置-20度或-80度,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融3次,使细胞充分裂解,也可将样品进行超声破碎,从而达到裂解的目的。4度10000×g离心10min,除去细胞碎片,取上清就可以检测,或将上清置于-20度或-80度存放,但应尽量避免反复冻融。

 

细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20min,取上清就可以检测,或将上清置于-20度或-80度存放,但应尽量避免反复冻融。


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